四色多重免疫荧光试剂盒Plus(兔鼠通用二抗) 成人 男同

　　旨趣先容: 酪酰胺信号放大(TSA ，Tyramide signal amplification)时候是一类诳骗辣根过氧化酶(HRP)对靶 卵白进行标记的酶学检测步伐，雷同惯例免疫组化的 DAB 显色步伐 ，TSA 时候相通选择 HRP 标记的二 抗，相通有对应的“显色 ”门径(HRP 催化加入响应体系的酪胺荧光素底物，产生存化荧光底物，活化底 物可与抗原上的酪氨酸等残基共价聚积，使样品上领略的共价聚积酪胺荧光素。之后用热开拓法大略抗体 洗脱液洗去非共价聚积的一抗-二抗-HRP 复合物，重叠下一种一抗-hrp 二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧 光素底物，如斯走动就可完毕多重标记。

　　TSA 详实旨趣是诳骗酪胺 Tyramide 的过氧化物酶响应(酪胺盐在 HRP 催化 H202 下酿成共价键聚积位 点) ，产生大宗的酶促产物，该产物能与周围的卵白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)聚积，这么在 抗原-抗体聚积部位就有大宗的荧光素千里积，完毕使其检测信号取得 10- 100 倍增强。粗浅来说，用这种步伐 作念多重免疫荧光是诳骗二抗上带有的 HRP(而不是径直偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧 光素。荧光素在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化，跟足下卵白的酪氨酸残基共价偶联，使得卵白样品与荧 光素领略聚积。然后微波或煮沸大略水浴等热开拓解决，前一轮非共价聚积的抗体被洗掉，共价聚积的荧 光素领略共价聚积在样本切片卵白上。再换个一抗来第二轮孵育，盛极必衰。比及通盘抗体孵育末端，荧 光素王人聚积好后，终末去检测完毕。 由于每次体系中王人惟有单一抗体孵育，因此无需惦记抗体交叉响应， 以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了现实野心时不同种属抗体选拔匹配的为止。也即是说，若是用 TSA 时候，兼并张片子上通盘的靶标王人不错选用特异性高的兔单克隆抗体。搭配兼并支抗兔的 HRP 二抗就不错 进行现实，并且信号放大的倍数大大增强。本公司开发的试剂盒具体酪胺荧光染料为以下其中一种大略多 种：TYR-480Plus ，TYR-520Plus ，TYR-570Plus ，TYR-620Plus ，TYR-690Plus ，TYR-780Plus 。此试剂盒中 的荧光染料可单独或互助使用。不错完毕单标、双标、三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光标记等 功能，极大丰富了此试剂盒的内涵。

　　四色多重免疫荧光试剂盒 试剂盒规格：100T

　　储存温度：4 度，一年有用

　　试剂盒构成：

　　称呼货号规格保存条款

　　TYR-520Plus 荧光染料RC001浓缩型，50ul ，200x4℃

　　TYR-570Plus 荧光染料RC002浓缩型，50ul ，200x4℃

　　TYR-690Plus 荧光染料RC004浓缩型，50ul ，200x4℃

　　TSA bufferRCB008624mL4℃

　　HRP 山羊抗兔/鼠通用二抗RCB05415mL4℃

　　Dapi 染液(即用型)RC0510mL4℃

　　抗体稀释液RCT00240mL4℃

　　3%过氧化氢RC01240mL4℃成人 男同

　　染料使用步伐：TSA 荧光染料响应液 =TYR-xxxPlus 荧光染料+TSA buffer;TYR-xxxPlus 荧光染料：TSA buffer=1：200;TYR-xxxPlus 荧光染料与 TSA buffer 的稀释比例不错把柄具体情况活泼调遣优化，最好鸿沟为 1:50-- 1:400(1:200 大部分情况能取得最好完毕);一般提出若一抗孵育时代常温 1h-3h 内，提出稀释比例 1:50- 1:200， 若一抗孵育时代 4 渡过夜(12h 或以上)，提出稀释比例 1:200- 1:400 或更高。

　　详实操作门径

　　1 、样本准备：

　　1)石蜡切片：秩序将切片放入二甲bⅠ15min-二甲bⅡ15min-无水酒精Ⅰ5min-无水酒精Ⅱ5min-95%酒精 5min-85%酒精 5min-75%酒精 5min ，蒸馏水洗。

　　2)冰冻切片：冰冻切片固定 10-30min，PBS 洗 5min，重叠 3 次，滴加 0.3% triton-X100 破膜液通透 20min，PBS 洗 5min ，重叠 3 次。

　　3)细胞爬片大略细胞涂片：细胞样本固定 10-30min ，PBS 洗 5min 重叠 3 次，滴加 0.3% triton-X100 破膜液通透 20min ，PBS 洗 5min ，重叠 3 次。

　　2、抗原开拓：组织切片置于盛满 PH 9.0 EDTA 碱性抗原开拓液大略 PH6.0 柠檬酸开拓缓冲液的开拓盒中于 微波炉内进行抗原开拓(也不错用高压 1-2min 100 度水煮 15min 95 度水浴 20min 等其他热开拓步伐)。中 火 8min ，息兵 8min ，转中低火 7min ，此经由中应驻守缓冲液过度挥发，切勿干片。 当然冷却后将玻片置 于 PBS(PH7.4) 中在磨灭摇床上徘徊洗涤 3 次，每次 5min 。(开拓液和开拓条款把柄组织类型以及抗原类 型来笃定，冰冻切片和细胞样本可概略此门径)。

　　3 、阻断内源性过氧化物酶：切片放入 3%过氧化氢溶液，室温避光孵育 15 min ，将玻片置于 PBS(PH7.4)中在磨灭摇床上徘徊洗涤 3 次，每次 5min。

　　4 、非特异性靶点紧闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(驻守抗体流走)，在圈内滴加用抗体稀释液(大略其他紧闭液 3%BSA 大略山羊血清)均匀笼罩组织，室温紧闭 30min 。稀奇领悟：抗体稀释液内含有多样保护剂以及防腐剂，不错用来紧闭 大略 稀释一抗，稀释后的一抗不错永恒四度保存(在常温下也不错保存一个月之久)

　　5 、加一抗：轻轻放胆紧闭液，在切片上滴加用抗体稀释液稀释好的的一抗 X ，切片平放于避光湿盒内 4°C孵育过夜大略 37 度 1-2h(湿盒内加少许水驻守抗体挥发);

　　6 、加 hrp 二抗：玻片置于 PBS(PH7.4) 中在磨灭摇床上徘徊洗涤 3 次，每次 5min 。切片稍甩干后在圈内 滴加与一抗相应种属的 hrp 二抗笼罩组织，避光室温孵育 50min ，PBS 洗三次。稀奇领悟：本试剂盒内自带 的 hrp 山羊抗兔/鼠通用二抗为即用型，具有超高智谋度，随时可用，无需建立。

　　7 、TSA 荧光染料响应液响应：浓缩型荧光染料与 TSA buffer 按照 1:50- 1:200 的比例搀杂均匀，切片滴加配 好的 TSA 荧光染料响应液均匀笼罩组织室温响应 1- 15min(最好时代 5min- 10min)，PBS 洗三次(预现实 可先染 1min洗干净荧光染料后显微镜下不雅察染色遵循，若是阳性弱赓续滴加荧光染料加强染色强度直至符合强度后赓续进行下一步)。

　　8 、抗体洗脱：石蜡切片置于抗原开拓液中 95 度水浴 25-40min(把柄不同抗体亲和力 活泼调遣时代)大略 滴加适量 37 度预热至透澈融化的mIHC 专用抗体洗脱液(冰冻切片 爬片 骨组织提出用)笼罩样本，37 度舍弃 5-20 分钟，弃去洗脱液，再次滴加适量抗体洗脱液笼罩样本 37 度舍弃 5-20 分钟，弃洗脱液，PBS 洗三次，每次 5 分钟(石蜡切片可用热开拓洗脱大略抗体洗脱液洗脱，细胞及冰切切片需用抗体洗脱液进行洗脱)

　　9 、 重叠 3-8 门径(换用另外一种 TYR-XXXPLus 荧光染料)---第二轮标记

　　10 、重叠 3-8 门径(换用另外一种 TYR-XXXPLus 荧光染料)---第三轮标记

　　11、重叠 3-7 门径(换用另外一种 TYR-XXXPLus 荧光染料)---第四轮标记

　　12、DAPI 复染细胞核：玻片置于 PBS(PH7.4)中在磨灭摇床上徘徊洗涤 3 次，每次 5min 。切片稍甩干后在圈内滴加 DAPI 即用型染液，避光室温孵育 5min-20min。

　　13 、封片：玻片置于 PBS(PH7.4)中在磨灭摇床上徘徊洗涤 3 次，每次 5min 。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片(我司有相应居品)。

　　14 、镜检拍照：切片于荧显豁微镜/共聚焦/多通谈荧光扫描仪/多光谱成像系统下不雅察并集聚图像。

　　染料激勉波长辐射波长

　　DAPI 蓝色350420

　　TYR-480Plus450480

　　TYR-520Plus 绿色490520

　　TYR-570Plus 红色550570

　　TYR-620Plus590620

　　TYR-690Plus630690

　　TYR-780Plus750780

　　四色多重免疫荧光试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家有益从事生物时候相关居品成人 男同，励志研发和销售的空洞性生物公司，居品远销多个国度和地区，咱们将一如既往地袭取“一切为了闲隙客户的需求"的计较主义;安然缔造“以客户需求为准则、以市集需求为导向，不休开发高质料的新址品，提供客户安逸的空洞做事质料"的标的。

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